为模范我国血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测，共鸣从检修前、中、后步调及其质地保障举办细致声明，并提出针对性倡议，为实习室发展该检测项目供给参考，以饱舞我国血清(浆)类固醇激素检测运用结果同等性

　　液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)正在人体血清(浆)类固醇激素检测中涌现出优于古板免疫学伎俩的特异性高、了解丈量畛域宽、多记号物同时检测等特性，已成为国际内渗透学界限相干疾病实习室诊断的首选伎俩。目前，国内医学实习室发展血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测多参考已揭晓学术论文和仪器厂家仿单供给的通用操作和检测步调。

　　然而，血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测的工夫难度大，临床实习室检修职员大家半短少质谱界限专业培训和实施经历，而通用步调缺乏针对性和实操性，特别我国尚无针对该检测步调和质地保障的体系性文献，导致实习室间检测结果存正在较大分歧，阻塞了该工夫的临床运用。

　　类固醇激素是一类拥有环戊烷多氢菲母核的脂肪烃化合物，遵循化学构造及心理功用可分为肾上腺皮质激素(糖皮质激素、盐皮质激素)、性激素(雌激素、雄激素、孕激素)及维生素D [ 1 ] ，正在人体孕育发育、能量代谢、免疫调剂、生育功用调剂等方面阐明首要感化。血清(浆)类固醇激素格表与天资性肾上腺皮质增生(congenital adrenal hyperplasia，CAH)、原发性醛固酮增加症、库欣归纳征、多囊卵巢归纳征(polycystic ovary syndrome，PCOS)、儿童发育延迟或性早熟等多种内渗透疾病亲近相干 [ 2 ] ，是以其检测通俗运用于多种内渗透疾病的临床商酌、诊断以及康健评估。古板免疫学伎俩只管主动化水准高，但特异性相对亏欠，且线性畛域窄，难以实行精准检测。液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)具备特异性高、了解丈量畛域宽等功能上风，且能正在短时辰内同时切实测定多品种固醇激素及中心代谢产品，是目前精准、整个定量了解血清(浆)类固醇激素的首选伎俩 [ 3 , 4 ] 。

　　只管已有浩瀚商酌报道多品种固醇激素的LC-MS/MS检测，包罗伎俩开荒和优化 [ 5 , 6 ] 、生物参考区间兴办 [ 7 ] 等，表洋已有针对血清(浆)雄激素、雌激素LC-MS/MS检测步调的指南 [ 8 ] ，国内有LC-MS/MS临床运用通用倡议共鸣及25羟-维生素D和雄激素LC-MS/MS检测的共鸣 [ 9 , 10 , 11 ] ，但依旧缺乏涵盖检修前、中、后阶段的LC-MS/MS检测操作步调和质地保障的指南和共鸣。基于此，为模范我国血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测，中国质谱学会临床质谱专家委员会构造专家参阅国内皮毛干文件并联络临床运用经历，面向医学实习室临床质谱检修职员，针对肾上腺皮质激素和性激素LC-MS/MS了解全流程的质地保障举办细致声明并提出倡议，为实习室发展血清(浆)类固醇激素检测项目供给参考，以饱舞我国血清(浆)类固醇激素检测的临床运用和结果同等性，提拔我国类固醇激素格皮毛干疾病的精准诊断技能。

　　人体类固醇激素浓度受多种身分影响，包罗日夜节律、心理周期、采血和药物等，应遵循临床简直需乞降激素程度影响身分，同意合理采样流程，并推选给标本收罗职员和患者。比如：皮质醇渗透平日正在清晨6：00—8：00抵达峰值浓度，是以峰值监测推选清晨收罗患者血液标本;连气儿监测则采样时辰点应相对固定 [ 12 ] ;醛固酮仰卧位采血比直立位采血检测结果低50% [ 13 ] ;女性患者举办血清(浆)雌激素检测时需了了卵泡期、黄体期等音信，看待无法则月经周期女性，需了了绝经(迥殊是早绝经)起因，如天然绝经、表科手术、辐射、药物感化等 [ 14 , 15 ] 。

　　含有分别胶的促凝管中存正在睾酮搅扰峰，且分别胶可接收类固醇激素，标本体积和贮存时辰也可分别水准影响检测结果 [ 16 ] 。重生儿CAH二级筛查中，EDTA采血管可导致17α-羟孕酮、雄烯二酮及11-脱氧皮质醇的LC-MS/MS检测结果偏高，酿成假阳性 [ 17 ] 。此表，调动采血管品牌或批号也恐怕影响待测物色谱峰分别度，应同意包罗峰分别度、保存时辰漂移畛域等色谱参数的可领受程序，以监测潜正在搅扰峰的影响强弱及改变。

　　倡议1 针对有日夜和/或周期节律的类固醇激素，实习室应遵循其临床预期用处，教导患者和采血职员采用合意的采血机遇，比如清晨采血检测皮质醇、睾酮程度，卵泡期采血检测雌激素程度。推选采用不含分别胶的血清(浆)采血管收罗标本，重生儿二级CAH筛查推选采用肝素抗凝剂采血管。

　　实习室应遵循类固醇激本质谱检测的标本存储要求及检测频率举办标本的平稳性验证 [ 18 ] 。标本平稳性验证明验应起码包罗情况温度、冷藏和/或冷冻要求下的平稳性，即使标本存正在冻存后复查的恐怕，还需考核频频冻融对标本平稳性的影响。此表，标本收罗、运输及前执掌阶段的平稳性也需举办评估。标本平稳性实习均需利用新奇血清(浆)，通过斗劲新奇收罗和存储后的血清(浆)标本检测结果评估其平稳性。

　　即使实习室遵循参考文件报道或试剂仿单设备标本存储要求，需蕴涵了了的平稳性、标本类型、类固醇激素浓度、存储温度畛域、存储时辰以及存储后标本浓度较新奇标本的改变百分比。为确保标本存储后类固醇激素检测结果“平稳”或“无彰彰改变”，需了了丈量步调、含量盘算步调及含量改变的可领受畛域。即使这些音信缺失，实习室应自行兴办标本平稳性的可领受要求。

　　倡议2 实习室应遵循标本存储的实质需求，利用新奇标本对来自文件报道或试剂仿单的标本平稳性举办验证，或自修平稳性可领受的标本存储要求。倡议血清(浆)标本中类固醇激素平稳存储的要求实时辰见 表1 。

　　标本前执掌伎俩取决于待测物的理化本质、精巧度哀乞降了解伎俩。其主意是将待测物从血清(浆)及其他潜正在搅扰物质平分别、提取、纯化，并实行看待测物的浓缩。大家半糖皮质激素(如17α-羟孕烯醇酮、17α-羟孕酮、11-脱氧皮质醇、皮质醇、可的松)和盐皮质激素(如孕烯醇酮、孕酮、脱氧皮质酮、皮质酮)为疏水构造，均可与相应转运卵白联络存正在于血液中，游离时势约占1%。但血液中，约50%醛固酮以游离时势存正在。睾酮和雌二醇与白卵白联络力弱，与性激素联络球卵白(sex hormone binding globulin，SHBG)联络力强，2%~4%睾酮呈游离时势，60%~75%睾酮与SHBG联络，20%~40%睾酮与白卵白联络 [ 1 ] 。均衡透析可去除血中联络型类固醇激素进而检测游离型激素程度，但丈量步调哀求更高的精巧度。即使联络型类固醇正在水解前无法被直接检测，则需水解后举办检测，并了完了合型类固醇是否全体水解，且水解程序不会导致类固醇降解，如硫酸雌酮正在提取之前需通过水解酶获取游离型雌酮。亲脂性性激素(雄烯二酮、睾酮、双氢睾酮、雌酮、雌二醇、雌三醇)较亲水性性激素(硫酸脱氢表雄酮、硫酸雌酮)正在血液中浓度低，是以亲脂性性激素的LC-MS/MS丈量步调平日必要更丰富的标本前执掌以歼灭基质搅扰并浓缩待测物以抵达理思的定量限(limit of quantification，LOQ)。

　　血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测的标本前执掌流程平日包罗：(1)取等量临床标本、程序品、质控品和基质空缺;(2)插手内标物;(3)提取;(4)纯化 [ 19 ] 。对易氧化的类固醇激素，前执掌时需尽恐怕避免产生氧化以防待测物降解及出现搅扰物。比如，正在样品浓缩时利用惰性气体(如氮气)，而非加热真空离心浓缩。去除可精通扰检测或影响前执掌的物质后，宜将了解物变化到液相色谱活动相洗脱溶剂中，连结初始浓度比例，以备后续了解。推选利用与待测物拥有形似构造和离子化本质的同位素象征物(或构造相像物)举动类固醇激素LC-MS/MS检测内标物，比如氘代或 13C象征的类固醇。通过斗劲已知浓度内标物与待测物的信号，校正样本前执掌、色谱分别、离子化进程及基质效应所出现的差错。类固醇激素的同位素内标物大家为商品化试剂，如无商品化试剂，应优先采用利用非内源性但与待测物构造相像的合成类固醇举动内标物，并确保内标物与待测物拥有相通或邻近保存时辰。内标物的相对分子质地应起码比相应待测物大3，氘代或 13C象征数目驾驭正在7，化学纯度应≥98%，同位素内标物纯度≥97%。

　　内标物需插手到全豹校准品、质控品和待测标本中，且应正在提取或纯化程序之前或同时插手。插手内标物后需静置足够长的时辰(平日15~30 min)以均衡内标物与联络卵白的彼此感化，抵消因卵白联络导致的检测浓度偏低，如睾酮和睾酮-d 3需30 min完结均衡(22 ℃)。内标物的质谱信号强度应正在分别了解批次中连结平稳，均衡时辰亏欠恐怕会导致内标物信号强度不屈稳。

　　倡议3 利用与待测物有相通理化本质的商品化同位素象征物举动类固醇激素LC-MS/MS检测内标物( 表2 )，浓度设备正在校准弧线的中浓度或医学确定程度相近，实习室应同意内标物信号强度振动的批间可领受畛域。

　　血液中存正在的多量卵白质、多肽、幼分子化合物等可惹起LC-MS/MS的离子源和检测器饱和，导致离子压迫或判袂率亏欠，搅扰检测结果。是以，LC-MS/MS了解前应提取待检测物，去除无机化合物(如盐)、卵白质、脂质(如甘油三酯)和磷脂等物质的搅扰，抬高检测精巧度、反复性平静稳性。

　　LC-MS/MS了解标本的提取伎俩包罗卵白浸淀(protein precipitation，PPT)、液液萃取(liquid-liquid extraction，LLE)、固相萃取(solid-phase extraction，SPE)等。PPT操纵卵白浸淀剂使卵白变性浸淀，离心后直接取上清液举办检测，不实用于含量较低或有卵白联络个性的类固醇激素。LLE操纵溶剂的形似相溶道理，将标的化合物从液体同化物平分别出来，因操作繁琐且必要打发多量有机溶剂，故临床常用固相支持液液萃取(supported liquid extraction，SLE)替换古板LLE，低浸有机溶剂打发。而SPE采用固体颗粒色谱填料(平日填充于幼柱型安装中)对样品分别组分举办化学分别，较SLE拥有更优的去磷脂搅扰技能，是类固醇激素标本提取的首选伎俩，但也拥有操作程序多、本钱上等舛讹。针对类固醇激素的分别极性，脂溶性激素平日采用亲脂基团填料的SPE伎俩萃取待测物，非脂溶性激素采用亲水基团或阴阳离子互换填料的SPE伎俩萃取待测物。为进一步去除与待测物协同洗脱的搅扰物，可撮合LLE和SPE，或吹干提取物后用分别溶剂从新提取。个中，通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography，HPLC)可正在线举办SPE，以裁减手工操作，节俭时辰和人力本钱，但目前尚无多品种固醇激素正在线SPE提取管理计划。也有通过利用单个或多个提取柱串联色谱柱，如提取/上样柱、一次性SPE柱、二维色谱，抬高色谱分别成果和检测精巧度，使血清(浆)标本无需或只需经轻易卵白浸淀执掌即可举办了解。

　　LC-MS/MS通过联络HPLC的高效分别浓缩技能与三重四极杆质谱的高特异性和高精巧度定量功能，切实丈量标本中浓度极低、理化本质形似的类固醇激素，其特异性较免疫学了解彰彰抬高。

　　1. HPLC分别：HPLC是一种基于待测物正在固定相和活动相中拥有分别分拨系数的分别工夫。平日利用对非极性分子拥有高亲和力的非极性固定相(如 18C、五氟苯基等)色谱柱分别类固醇激素 [ 20 ] ，通度日动相极性改变将吸附于色谱柱上的类固醇激素从新溶于活动相，从而实行慢慢洗脱分别。通过开荒缜密的活动相梯度洗脱步调和利用适合的色谱柱可能分别构造卓殊形似的类固醇激素及其代谢物，包罗极少同分异构体(如21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质醇)。通过依序洗脱标本中全豹待测物，低浸检测信号的丰富度，分别组分信号随时辰浮现一组近似高斯漫衍的色谱峰群，天生检测信号强度随时辰改变的色谱图。此表，活动相中平日插手挥发性增加剂(如0.01 mol/L甲酸铵、0.1%甲酸)，其浓度不应超出0.5%，以加深化合物离子化，而不应含非挥发性活动相增加剂。色谱柱可采用粒径较幼的分别柱，实行短时辰内更好的分别成效，也可遵循文件归纳采用。色谱柱应正在寿命刻期内利用，并遵循检丈量、峰型、保存时辰、分别度、柱压等参数推断是否必要调动。实习室应做好色谱柱的平素保护，正在逐日检测了结后举办平素冲刷步调，并最终将色谱柱连结正在95%及以上的甲醇或乙腈中，尽恐怕地延伸色谱柱的利用寿命及利用质地。

　　2. 串联质谱检测：类固醇激素LC-MS/MS丈量步调利用的离子源苛重包罗电喷雾电离(electrospray ionization，ESI)和大气压化学电离(atmospheric pressure chemical ionization，APCI)。正在老例临床检测中，醛固酮、皮质醇、11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇、可的松、睾酮、孕酮、17α-羟孕酮、皮质酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮可采用ESI或APCI离子源。与ESI比拟，APCI离子源温度更高，脱溶剂更弥漫，是以基质效应更幼。然而，APCI更实用极性较幼的类固醇激素，如3β-羟基-5-烯类固醇 [ 21 ] ，正在需同时检测多个类固醇激素的临床运用中拥有部分性。

　　类固醇激素分子经离子源电离落伍入三重四极杆质地了解器，遵循质荷比举办分别，并采用多反响监测(multiple reaction monitoring，MRM)或采用反响监测(selected reaction monitoring，SRM)形式收罗数据。最终借帮质地了解器采用特定母离子和子离子，通过母离子/子离子对和各了解物及内标物的色谱图及峰面积对标的化合物举办定量。分别仪器，其离子对音信及检测参数并不全体相通，每个化合物平日采用2个离子通道分辨举动定性离子和定量离子通道( 表3 )。基于定性离子、化合物极性及内标物分别峰归纳推断标的化合物的分别峰。

　　倡议6 类固醇激素LC-MS/MS检测采用ESI或APCI离子源，采用MRM或SRM形式，应正在功能验证时优化质谱参数。

　　3. LC-MS/MS丈量步调功能验证和/或确认：丈量步调的功能哀求取决于其预期临床用处、待测类固醇激素生物学变异及仪器精巧度程度。如检测女性、儿童血清睾酮，丈量步调的精巧度必要抵达0.02 ng/ml;同时检测浓度分歧大的多个了解物，如雌二醇、雌酮、雄烯二酮，需验证丈量步调对每个了解物的了解功能是否知足临床需求。值得留心的是，因为血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS丈量步调蕴涵的人为操作程序多，各实习室情况要求、仪器装备装备、职员程度相差大，是以尽管实习室利用商品化试剂盒(Ⅰ、Ⅱ类)，也应举办功能确认或验证。LC-MS/MS丈量步调功能验证和/或确认步调可参考共鸣 [ 22 ] 或美国临床和实习室程序协会(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)C62-A [ 23 ] ，并遵循生物变异、临床指南、策略律例等设定功能验证中每项参数的可领受程序。

　　类固醇激素相干疾病的临床诊断对检测目标及精巧度有分别需求，实习室应归纳临床需求及仪器精巧度确定LC-MS/MS丈量步调了解功能。

　　1.肾上腺皮质激素：皮质醇是最苛重的肾上腺皮质激素(约占75%~95%)，血液中总皮质醇、游离皮质醇程度及日夜节律改变常用于辅帮诊断原发性和继发性肾上腺功用不全、库欣归纳征、艾迪生病。寻常成人清晨血清总皮质醇浓度平日正在20~50 ng/ml，经均衡透析后的游离皮质醇浓度约占总皮质醇5%，可更切实反响皮质醇程度及节律，推选检测血清(浆)游离皮质醇(LOQ≤1 ng/ml)。皮质醇撮合17α-羟孕酮、雄烯二酮常用于筛查11-羟化酶或21-羟化酶缺乏型CAH。大家半(约90%)CAH由21-羟化酶基因变异导致，患者血清雄烯二酮程度平日升高5~10倍，17α-羟孕酮程度升高幅度更大，而皮质醇程度较低或无法检测。分别岁数、性别人群17α-羟孕酮及雄烯二酮程度分歧较大，推选实习室检测17α-羟孕酮(LOQ≤0.1 ng/ml)，检测区间上限设定正在参考区间上限10倍以上 [ 24 ] 。

　　硫酸脱氢表雄酮、孕烯醇酮、孕酮、17α-羟孕烯醇酮、11-脱氧皮质酮和18-羟皮质酮常用于已解除11-羟化酶、21-羟化酶缺乏型CAH，及确认3β-羟基类固醇脱氢酶缺乏和17α-羟化酶缺乏型CAH。正在卓殊罕见的17α-羟化酶缺乏症中，雄烯二酮、全豹雄激素前体(17α-羟孕烯醇酮、17α-羟孕酮、硫酸脱氢表雄酮)、睾酮、雌酮、雌二醇和皮质醇程度低浸，而盐皮质激素(孕酮、11-脱氧皮质酮和18-羟皮质酮)程度彰彰升高。醛固酮是表率的盐皮质激素，常用于辅帮诊断原发性醛固酮增加症(如肾上腺肿瘤、肾上腺皮质增生)和继发性醛固酮增加症(如肾血管疾病、盐耗竭、钾负荷、肝硬化腹水、心力衰竭、怀胎、Bartter归纳征)，以上处境醛固酮程度平日可升高10~100倍。是以，倡议醛固酮LOQ≤0.02 ng/ml，检测区间上限设定正在参考区间上限100倍( 表4 )。

　　2.雄激素：LC-MS/MS较易检测寻常成年男性雄激素程度，但对低雄激素程度人群，如女性、儿童以及性腺功用减退的男性，则哀求丈量步调拥有更高的精巧度。对成年女性，睾酮程度平日用于评估由肾上腺合成格表和PCOS导致的高雄激素血症及相干的女性多毛症、月经繁芜、不孕等疾病。对儿童，睾酮程度平日用于评估表生殖器性别含混、性早熟或发育延迟，以及用于CAH的诊断。倡议女性或儿童的睾酮丈量步调LOQ≤0.02 ng/ml，并需装备高精巧度LC-MS/MS体系，并对样品举办离线或正在线前执掌，如LLE、SPE或多个提取程序联络(如PPT联络SPE) [ 8 ] 。

　　双氢睾酮以及双氢睾酮/睾酮比值可用于诊断雄激素缺乏症、监测雄激素替换调整或5α-还原酶压迫剂疗效，倡议采用双氢睾酮非衍生化法LC-MS/MS检测(LOQ≤0.05 ng/ml)。雄烯二酮还可用于诊断和评估女性高雄激素血症、多毛症、不孕症，儿童性早熟、发育延迟、CAH，以及肾上腺、性腺肿瘤。正在CAH、女性高雄激素血症等疾病中，雄烯二酮程度彰彰升高，但正在3β-羟基类固醇脱氢酶缺乏症、17α-羟化酶缺乏症及类固醇合成急性调剂卵白缺乏症等罕见病及2岁以下儿童中，其程度较寻常成人彰彰低浸，倡议其LOQ≤0.02 ng/ml。雄烯二酮检测的子离子与睾酮子离子拥有相通的质荷比，是以实习室需验证睾酮和雄烯二酮的色谱分别度。

　　脱氢表雄酮和硫酸脱氢表雄酮除撮合肾上腺皮质激素用于CAH辅帮诊断以表，还可用于识别诊断肾上腺功用不全或亢进。与性激素撮合可用于分辨肾上腺功用初现与性早熟，诊断儿童CAH和女性PCOS。儿童脱氢表雄酮程度较低(平日1~8岁儿童

　　倡议7 实习室应遵循临床需求、待测类固醇激素生物学变异及仪器精巧度程度，兴办了解功能知足哀求的类固醇激素LC-MS/MS丈量步调( 表4 )。

　　1. 量值溯源：量值溯源是通过一条拥有了了不确定度的不间断转达链，使丈量结果的量值可以与章程的参考程序(国度或国际计量程序)相干起来 [ 28 ] 。类固醇激素量值的可溯源性是实实际验室间丈量结果同等的根本，即统一标本正在分别时辰和所在采用分别丈量步调取得切实丈量结果。实习室应参考国际程序化构造(International Organization for Standardization，ISO)17511文献及中国及格评定国度认同委员会合于丈量结果的计量溯源性文献哀求兴办计量溯源链，主题因素包罗被测物、参考物质、校准及赋值步调、丈量结果验证 [ 28 ] 。

　　实习室应参考国际临床化学和检修医学撮合会/国际纯粹与运用化学撮合会文献了了被测物属性，包罗了解物个性(如化学时势)、丈量基质、单元等;可通过检修医学溯源撮合委员会网站或国度程序物质资源共享平台盘查参考物质音信，并优先采用拥有了了溯源音信的参考物质(如有证参考物质)举动校准品。对无有证参考物质的类固醇激素，实习室应参考CLSI EP30评估校准品的个性、纯度、均一性、平稳性及互通性并同意相干评估步调 [ 29 ] 。

　　需了了的是，计量溯源链自己并不直接保障丈量结果的切实性和同等性，溯源链中每次量值转达都市新增丈量不确定度，丈量的切实度和不确定度也恐怕正在利用新校准品或仪器大修后转折，实习室应通过检测校准品、参与技能验证设计或实习室间比对，了了丈量步调的无误度和缜密度。

　　2. 校准：校准是确定或校正质谱仪检测信号强度与待测物浓度之间的相干性。平日将校准物质插手到经活性炭执掌、不含待测类固醇激素的简单来历或同化血清(浆)基质中以造备一系列稀释校准品。类固醇激素LC-MS/MS丈量步调功能验证、调动试剂或校准物批号后，需确定每个了解批校准弧线的斜率、截距和相关联数的可领受程序。每个了解批都需举办校准，即使一个了解批蕴涵的样品许多，校准品可正在了解批分别职位进样，并监测每个校准品检测值与表面值的偏倚，以了了正在大样本量了解中的校准漂移处境。

　　校切实认是采用与检测临床标本相通的丈量步调，了解正在告诉畛域内已知待测物浓度的标本或商品化室间质地评议(external quality assessment，EQA)质控物以确认仪器或检测体系的校准，验证正正在利用的校准弧线正在检测患者标本时依旧有用。倡议正在转移程序品批次后、确认分别了解批之间的校准有用性时，发展校切实认。校切实认品应与实质患者标本相通或拥有形似的本质，并与患者标本举办相通的前执掌。与患者标本基质分此表质控品和校准品不成举动校切实认品。

　　3. 室内质地驾驭：血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS丈量步调室内质控的难点是获取与患者标本基质邻近且平稳性好的质控品。看待多组分了解的血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS丈量步调，应优先采用临盆质控苛苛、平稳性了了，并同时蕴涵多个待测组分的商品化质控品。利用经执掌的血清(浆)、冻干或合成基质质控品的一个彰彰舛讹是，因与患者标本基质不全体相通而出现分此表质谱相应。而未增加了解物的患者血清(浆)质控品恐怕正在评估丈量步调功能时比经由执掌的质控品更牢靠。如通过将类固醇纯溶液程序品增插手基质造备质控品，用于造备质控品的类固醇程序品批号及基质应有别于造备校准品的类固醇程序品及基质。此表，实习室可利用低、中、高浓度的单个或同化患者样本举动质控品。为了保障质控结果解读的同等性，质控样品应多量量造备，分装贮存，并了了质控品的贮存平稳性及与患者标本基质的同等性。

　　实习室应自行确定质控物靶值及最大许可不缜密度( 表4 )，将质控物就寝正在每一了解批内和了解批间的分别职位检测，以监测丈量步调的批内、批间漂移处境。可参考《临床检修定量测定室内质地驾驭 WS/T641-2018》 [ 30 ] 兴办丈量步调的质控计划和失控原则(如1 3 s 、3 2 s 等)，以及失控后执掌步骤，如了解批内质控不足格，应复测标本。

　　倡议10 实习室应优先采用质地牢靠、与患者标本基质同等的质控物，确定质控物靶值及最大许可不缜密度，兴办质控计划、失控原则和执掌步骤。

　　4. 了解批设备：血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS丈量寻常分批举办，了解批的长度取决于体系校准平稳性和本钱效益。一个表率的了解批应蕴涵校准品、质控品、患者样本、空缺样品、校切实认品(用于验证校准弧线的有用性，非必定)。实习室通过校准弧线、质控和校切实认监测每个了解批的有用性。当检丈量大于2×96个时，倡议每检测批次(96个/批次)都蕴涵校准品、质控品和空缺样本。实习室应确定并文献化血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS丈量步调的了解批长度 [ 31 ] 。

　　倡议11 实习室应遵循血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS丈量体系的平稳性和本钱效益确定了解批的长度，并通过校准弧线、质控和校切实认监测每个了解批的有用性。

　　5. 技能验证/室间质地评议：因为血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测步调程序化亏欠，基于分组数据举办丈量结果同等性评估的EQA设计价钱有限。无误度验证设计可同时监测丈量步调的无误度和同等性，实习室应按期(1~2次/年)参与国度卫生康健委和/或省级临床检修核心无误度验证设计，如卫生康健委临床检修核心构造的类固醇激素无误度验证。无误度验证设计利用经起码步调执掌的临床样本，通过参考伎俩对类固醇激素定值后，用于评估参评实习室LC-MS/MS丈量步调的无误度和量值溯源性。对无无误度验证和室间质地评议设计的类固醇激素LC-MS/MS检测项目，实习室需按期(如2次/年)举办实习室间比对，并应优先采用通过ISO15189认同的实习室，以保障明验室间结果的同等性。

　　倡议12 实习室应按期(1~2次/年)参与国度卫生康健委和/或省级临床检修核心构造的类固醇激素检测技能验证设计，无技能验证设计的项目需按期(2次/年)举办实习室间比对。

　　实习室应兴办患者样品、空缺样品、校准品和质控品的数据执掌、峰积分的程序操作步调，并正在每一次临床检测中连结同等。数据执掌软件应带有审核追踪功用可盘查每个样品的数据执掌伎俩。

　　1. 校准弧线领受准则：以校准品/内标物浓度比值为 X轴、了解物/内标物相应比值为 Y轴，构修校准弧线，将每个患者样品、质控品和空缺样品的了解物/内标物相应比值代入校准弧线方程盘算被测物浓度。了解患者标本时利用的校准弧线回归伎俩应与举办丈量步调功能验证时利用的伎俩连结同等，大家半处境采用线性回归。即使校准弧线数据方差分别质(分别浓度点分歧分别)，推选利用1/ x或1/ x 2权重回归了解以使低浓度校准点的偏倚正在可领受畛域。实习室应通过观测每个校准浓度点的相对偏向或总相对偏向采用合意的权重了解伎俩。

　　血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS丈量步调功能验证应了了校准弧线可领受程序：利用校准弧线盘算出的校准品浓度与表面浓度之间偏倚可领受畛域为85%~115%(LOQ浓度点：80%~120%)。确定校准弧线斜率和截距的可领受程序，盘算相关联数、确定其领受畛域(平日需>

　　0.99)，并运用于老例了解的评估。校准弧线的可领受程序应与丈量步调功能(如切实度)完婚。

　　倡议13 血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS丈量校准弧线盘算的校准品浓度与表面浓度之间偏倚的可领受畛域推选设备为85%~115%(LOQ浓度点：80%~120%)。

　　2. 色谱峰积分：应正在类固醇激素LC-MS/MS老例检测中通过优化积分参数完结色谱峰的主动积分，以尽量避免操作职员手动积分导致的分别等性。平日利用3倍LOQ浓度类固醇激素样品的色谱峰优化主动积分参数。对色谱峰举办滑润执掌可提拔积分切实性，仪器配景杂质信号过高或色谱峰收罗数据点亏欠可导致色谱峰不足滑润。但色谱峰太甚滑润会导致峰形变宽和损失细节，如将肩峰滑润进待测物的色谱峰，将影响待测物定量结果切实性。看待采样率较慢的体系，可利用成组滑润伎俩减幼配景杂质信号的影响。经历性色谱峰滑润参数应正在全豹样品了解中连结同等。

　　倡议14 应尽量通过优化积分参数完结每个待测类固醇激素的色谱峰主动积分，避免手动积分，实质标本检测需同一峰积分、滑润参数。

　　3. 色谱峰核查：正在类固醇激素LC-MS/MS丈量步调功能验证时，应兴办色谱峰保存时辰、配景杂质信号强度、峰形和峰判袂率的核查原则。理思的色谱峰是对称的且基线分别完善。即使一个了解批内有样品色谱峰基线分别不完善、峰形变宽或裂分，解除管道衔尾不无误的起因，应试虑调动色谱柱。实习室必需核查色谱峰的保存时辰以确保待测物了解峰的无误积分，并正在程序操作流程中了了保存时辰的最大许可漂移畛域，了解批间的改变应不超出±2.5%。样品平了解物色谱峰的保存时辰应与校准品的保存时辰同等。实习室可采用人为核查色谱峰，也可通过正在仪器驾驭软件中设备色谱峰核查参数主动完结。即使利用主动色谱峰核查，实习室需验证主动核查参数及流程的有用性，同时了了需人为介入核查的处境。

　　倡议15 实习室应兴办每个待测类固醇激素的色谱峰保存时辰、配景杂质信号强度、峰形、峰判袂率的核查原则和许可畛域。

　　4. 内标峰面积核查：通过盘算每个类固醇激素LC-MS/MS检测样品内标峰面积与校准品均匀峰面积的比值确定每个样品的内标峰面积接管率。内标接管率用于校正了解物提取接管率，每个样品内标峰面积分别是可领受的，但正在功能验证时应兴办样品之间内标峰面积转化的最大可领受畛域。样品内标峰面积接管率浮现彰彰低浸提示前执掌成果低或存正在其他可导致离子压迫的搅扰物或存正在搅扰内标定量离子对的杂质峰。看待内标峰面积比前后样品少2/3或50%的样品，应复检。彰彰升高的接管率提示内标峰蕴涵搅扰峰，也需复检。可通过内标峰面积随进样量改变作图，识别过低或过高的接管率。

　　倡议16 实习室应平素监测每个待测类固醇激素的内标峰面积正在程序品、质控物及标本间的振动，兴办内标峰面积振动的最大可领受畛域。

　　5. 定性离子对监测：类固醇激素LC-MS/MS老例检测中，一个离子对用于定量了解(定量离子对)，另一个离子对用于定性了解(定性离子对)。定性离子对用于了解物定性，正在识别样品搅扰物中阐明首要感化。定量离子对峰面积与定性离子对峰面积的比值正在分别样品间应连结同等，即使产生改变则提示存正在搅扰物质。即使无法检出定量或定性离子对则提示样品中不存正在该了解物或存正在搅扰物，应进一步了解起因。应同时评估了解物和内标物的定量离子对/定性离子比较值。定性离子对应正在扫数丈量区间有平稳的相应，避免利用脱水分子、脱乙酰基、脱甲基或加合物的子离子设备定性离子对。丈量步调功能验证时应兴办定量/定性离子比较值分歧的可领受畛域(如±30%)，并正在每一个样品检测中予以监测。

　　倡议17 实习室应平素监测每个待测类固醇激素的定量/定性离子对峰面积比值正在程序品、质控物及标本间的振动，并设备最大可领受畛域。

　　1.数据存储：实习室应存储血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS了解出现的完善原始数据和执掌数据，包罗丈量步调利用的色谱和质谱参数设备、每个离子对的色谱和质谱数据等，须要时利用独立体系备份数据。

　　2.参考畛域：因为抗原抗体非特异性反响及与LC-MS/MS丈量结果的偏向，采用免疫法兴办的类固醇激素参考畛域寻常不实用于LC-MS/MS丈量步调，然而我国目前尚未兴办公认同一的类固醇激素LC-MS/MS检测参考畛域，实习室可参考CLSI EP28针对标的检测人群验证表洋巨子机构兴办的参考畛域 [ 32 ] ，分别类固醇激素需按性别、岁数和/或月经周期分组，比如绝经前妇女的雌二醇、雌酮和雌三醇的浓度因月经周期或怀胎阶段的分别而有较大分歧。

　　倡议18 实习室可针对标的检测人群验证表洋巨子机构兴办的类固醇激素LC-MS/MS参考畛域，推选兴办中国人群的参考畛域。

　　3.结果解读及告诉：肾上腺皮质激素代谢终产品醛固酮和皮质醇浓度增高分辨和醛固酮增加症和皮质醇增加症(库欣归纳征)亲近相干;17α-羟孕烯醇酮、17α-羟孕酮及其雄激素代谢产品(如脱氢表雄酮、雄烯二酮)程度的格表往往与女性PCOS、高雄激素血症及性发育格表等内渗透疾病相干;绝经后女性雌二醇检测是乳腺癌发病危急评估的合头;对女性和芳华期前儿童体内睾酮的检测是识别儿童性早熟、女性高雄激素血症和PCOS的合头;对峰谷游离皮质醇的切实检测可有用辅帮诊断库欣归纳征;对17α-羟孕酮、雄烯二酮、孕烯醇酮、孕酮、17α-羟孕烯醇酮、11-脱氧皮质酮和18-羟皮质酮的切实检测是确定CAH亚型的首要凭借。另表，血清(浆)类固醇激素检测结果的解读应基于标的患者某人群的根本音信，如性别、岁数、心理期、日夜节律及立卧位等，对结果解读拥有首要参考意思。是以，实习室应为类固醇激本质谱检测的标的人群兴办特性化的结果解读原则。为了告诉的切实性，类固醇激素结果的解读还应联络类固醇代谢通道和临床开端诊断。

　　倡议19 实习室应联络患者临床音信、伎俩功能、临床预期用处、类固醇代谢通道解读和告诉血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测结果。

　　血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测正在正确评估类固醇激素程度、诊断类固醇激素失衡相干疾病(如CAH、肾上腺功用不全、高雄激素血症等)、监测调整成效中阐明着越来越首要的感化。本共鸣对血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测全流程举办了细致声明，包罗标本收罗、存储、运输及前执掌的检修前进程，LC-MS/MS定量了解伎俩、了解功能目标、质地保障、数据征采及了解的检修中进程，以及数据存储、参考畛域、结果解读及告诉的检修后进程，并提出19项针对性倡议供实习室参考。本共鸣旨正在模范我国血清(浆)类固醇激素LC-MS/MS检测步调，提拔其检测质地和结果同等性，饱舞其临床运用。

　　执笔人：李霖(四川省医学科学院 四川省国民病院临床医学检修核心)，蒋黎(四川省医学科学院 四川省国民病院临床医学检修核心)，郭玮(复旦大学从属中山病院检修科)，邱玲(中国医学科学院 北京协和病院检修科)

　　专家构成员(以姓氏拼音排序)：曹正(首都医科大学从属北京妇产病院检修科)，戴锦娜(中国医科大学从属第一病院检修科)，俸家富(绵阳市核心病院检修科)，郭启雷(山东英盛生物工夫有限公司)，郭玮(复旦大学从属中山病院检修科)，郭晓兰(川北医学院从属病院检修科)，黄庆[陆军军医大学从属大坪病院(陆军特征医学核心)检修科]，蒋黎(四川省医学科学院 四川省国民病院临床医学检修核心)，蒋廷旺(常熟市第二国民病院转化医学科)，柯江维(江西省儿童病院医学检修科)，李霖(四川省医学科学院 四川省国民病院临床医学检修核心)，李卿(上海市临床检修核心参考丈量实习室)，李水军(上海市徐汇区核心病院核心实习室)，李艳妍(吉林大学第一病院检修科)，廖璞(重庆市国民病院检修科)，刘华芬(杭州凯莱谱精准医疗检测工夫有限公司)，刘靳波(西南医科大学从属病院医学检修科)，卢丽萍(中国医科大学从属盛京病院检修科)，闵迅(遵义医科大学从属病院医学检修科)，倪君君(和合诊断集团商酌院)，聂滨(宜宾市第二国民病院检修科)，潘柏申(复旦大学从属中山病院检修科)，邱玲(中国医学科学院 北京协和病院检修科)，王成彬(总病院检修科)，王书奎(南京医科大学从属南京病院医学检修科)，夏勇(广州医科大学从属第三病院检修科)，徐元宏(安徽医科大学第一从属病院检修科)，张传宝(国度卫生康健委临床检修核心生化室)，张华(贵州省国民病院检修科)，赵蓓蓓(金域医学临床质谱检测核心)